2024-04-02 00:18:27
一、细胞培养基的概念和原理细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境,是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同,英文都是medium。当它是粉剂时,倾向性地称为培养基,而将粉剂配成液体后,多称为培养液。培养液中常常补加血清、等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。天然细胞培养基是人们早期采用的细胞培养基,直接取自于动物组织提取液或体液,如血浆凝块、血清、、胚胎浸出液等。营养价值高,但成分复杂,差异大、不稳定,来源也受到限制。水解乳蛋白和胶原是两种较好的天然培养基,富含氨基酸。血清是天然培养基中有效和常用的培养基,但其组成成分复杂,其中一些成分与功能不明确。血清的来源有胎牛血清、小牛或成牛血清、马血清、鸡血清、羊血清及人血清,广泛应用的为胎牛血清和小牛血清。 菩禾生物生产的大鼠滑膜细胞采用胰蛋白酶和胶原酶混合消化制备而来,细胞总量约为5×105个/瓶。皮肤肥大细胞完全培养基生产
10、L15细胞培养基L-15培养液适用于快速增殖瘤细胞的培养,用于在CO2缺乏的情况下培养肿瘤细胞株。此培养液采用磷酸盐缓冲体系,氨基酸组成进一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。至于选择何种培养基并没有一定的标准,有几点建议可供参考:(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞优先的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。也可以在一些生物公司的网站上搜索,如Invitrogen网站上有一个CellLineDatabase的工具,选择你感兴趣的细胞类型,它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等,有时还有优化好的转染步骤,很方便。(2)其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。(3)根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选RPMI1640。(4)用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择佳培养基,这是客观的方法,但比较繁琐。 肾间质成纤维细胞完全培养基生产2)滑膜细胞增生,表现为不依赖于支持物生长,并且分泌大量的效应分子来促进炎症和关节损坏。
,pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品,用注射用水(水温20℃-30℃)溶解至1L,加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中,用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。按中华人民共和国药典2005年版二部附录ⅥH进行;加入规定量的碳酸氢钠到上述溶液中,按中华人民共和国药典2005年版二部附录ⅥH进行,在空气中放置水分会很快升燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂,其丰富的营养成分有利于微生物生长,控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖,保持细胞培养基的养分。按中华人民共和国药典2005年版二部附录ⅧL干燥失重测定法进行。
2)优点和缺点血清是非常复杂的混合物,成分多样,含有各种生理平衡的分子量差别很大的生物分子,有的对细胞生长有促进作用,如含有携带、矿物质、微量元素和脂类物质的转运蛋白等。血清能够提供细胞贴壁因子和扩散因子。血清中含有起稳定作用和的因子,能够维持培养基的pH值并抑制蛋白酶直接或间接的酶解。但是血清的加入也带来了很多问题:(1)血清的成份可能有几百种之多,目前对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;(2)血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;(3)不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。(4)对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长。 b型滑膜细胞(flc)又称成纤维滑膜细胞,分裂增殖迅速,可以体外传代培养。
细胞培养基是细胞培养的基础,它为动物细胞的健康快速成长提供营养物质。所以只要用到细胞来制造生物技术产品,细胞培养基的重要作用就无可替代。二、细胞培养基的种类与基本成分组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、、鸡胚浸出液等。组织培养技术建立早期,体外培养细胞都是利用天然培养基。但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大,因此逐渐被合成培养基所替代。,培养某些特殊细胞也用人血清、马血清等。选择用牛血清培养细胞的原因主要是来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解。牛血清分为小牛血清、新牛血清、胎牛血清。小牛血清取自出生10~30天的小牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;胎牛血清应取自剖腹产的胎牛。显然,胎牛血清是品质高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分少。 建议使用低代次的MSCs(